聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過(guò)程？
發(fā)布時(shí)間：2018-01-27 10:54:50 編輯：博旭環(huán)保 銷(xiāo)售熱線(xiàn)：185-3821-8884
聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過(guò)程
（1）制膠 在兩塊制膠玻璃板中間放上墊片，放上制膠架，擰緊制膠螺絲夾緊玻璃板。 制備適量合適濃度的凝膠，使之略多于膠板。
不同濃度（%）聚丙烯酰胺凝膠的制法：
在加入 TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨后，立即混勻，倒入放置 45℃角的玻璃板內(nèi)，完全注滿(mǎn)（注 意不要有氣泡） ，迅速將玻璃板放置水平位置。立即放成型梳子于腔頂并夾緊，待 30-60 分 鐘膠聚合后，取下膠板，放入電泳槽中固定。
（2）加樣和電泳 上下槽中加入 1×TBE 電泳緩沖液，溢過(guò)加樣孔，拔出梳子，排出加樣孔中的氣泡，將 PCR 產(chǎn)物或限制性?xún)?nèi)切酶消化產(chǎn)物 2 與 1 上樣緩沖液混勻， 用微量注射器加入加樣孔底部， 使樣 品在孔底成一層，兩側(cè)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)分子量的 DNA Marker。 以 2-10V/cm 電壓電泳，電泳時(shí)間足夠長(zhǎng)，使片斷足以分開(kāi)，待指示劑走到適宜位置時(shí)關(guān)閉 電源，將膠片取出。
（3）銀染 分開(kāi)兩塊玻璃板， 將凝膠片放入 100ml 銀染固定液中振蕩 15min， 雙蒸水洗 3 次， 每次 2min， 然后將凝膠片轉(zhuǎn)入 100ml 0.2%的 AgNO3 中于搖床上染色約 10min，吸去 AgNO3 液，用雙蒸 水洗 3 次，每次 30s，加入 100ml 顯色液約 7-10min，待 DNA 帶顯示清除時(shí)，吸去顯色液， 加入固定液 Na2CO3，靜置 2-3min，取出凝膠觀察。
